Производство бета-каротина
Биотин, витамин H (B7)
|
Тиаминпирофосфат, витамин B1
|
|
|
Рибофлавин, витамин B2
|
Пантотеновая кислота, витамин B5
|
|
|
Пиридоксин, витамин B6
|
мио-Инозит, витамин B8
|
Никотиновая кислота, Ниацин, витамин PP
|
|
|
Для определения потребности исследуемого штамма в том или ином витамине его выращивают на стандартной среде, содержащей определенный витамин, и сравнивают с ростом на этой же среде, не содержащей витаминов. В случае, если добавление витамина приводит к существенному увеличению роста, делают вывод о ауксотрофности штамма по этому витамину. Тесты на способность к росту на безвитаминной среде и определение потребности в конкретных витаминах входят в стандартное описание вида дрожжей.
Зависимость скорости роста ауксотрофных штаммов дрожжей от содержания определенных витаминов была использована для разработки методов определения концентрации витаминов в различных средах по измерению прироста дрожжевой биомассы.
Стандартные среды для физиологических тестов
Разделение дрожжей на виды базируется на многих характеристиках, среди которых важное место занимают как морфологические, так и физиологические признаки - способность к росту на различных органических соединениях в качестве единственного источника углерода и энергии, способность к усвоению различных источниках азота, потребность в различных витаминах и т.п. Все эти характеристики сильно зависят от состава среды и условий культивирования, поэтому в систематике дрожжей разработаны и применяются среды стандартного состава. Полный набор таких сред выпускается в готовом виде фирмой Difco (Difco Laboratories, в 1997 г. вошедшая в состав BD Diagnostic Systems). Среди этих сред наиболее популярны: морфологический агар - для описания макро- и микроморфологических характеристик дрожжевой культуры, азотная основа - для определения способностей к росту на различных источниках углерода, углеродная основа - для определения способности к усвоению различных источников азота, базвитаминная среда - для определения потребностей в витаминах.
Состав этих сред приведен в таблице:
Ингредиенты (на 1 л воды)
|
Морфологи-ческий агар
|
Азотная основа
|
Углеродная основа
|
Среда без витаминов
|
|
Источники углерода и азота, г
|
|
Глюкоза
|
10
|
--
|
10
|
10
|
|
(NH4)2SO4
|
3.5
|
5
|
--
|
5
|
|
Аспарагин
|
1.5
|
--
|
--
|
--
|
|
Макроэлементы, г
|
|
КH2РO4
|
0.85
|
0.85
|
0.85
|
0.85
|
|
К2НРО4
|
0.15
|
0.15
|
0.15
|
0.15
|
|
MgSO4
|
0.5
|
0.5
|
0.5
|
0.5
|
|
NaCl
|
0.1
|
0.1
|
0.1
|
0.1
|
|
СаСl2
|
0.1
|
0.1
|
0.1
|
0.1
|
|
Аминокислоты, мг
|
|
L-Гистидин НСl
|
10
|
10
|
1
|
10
|
|
DL-Метионин
|
20
|
20
|
2
|
20
|
|
DL-Триптофан
|
30
|
20
|
2
|
20
|
|
Витамины. мкг
|
|
Пантотенат кальция
|
2000
|
2000
|
2000
|
--
|
|
Фолиевая кислота
|
2
|
2
|
2
|
--
|
|
Инозит
|
10000
|
10000
|
10000
|
--
|
|
Никотиновая кислота
|
400
|
400
|
400
|
--
|
|
Парааминобензойная кислота
|
200
|
200
|
200
|
--
|
|
Пиридоксин НСl
|
400
|
400
|
400
|
--
|
|
Рибофлавин
|
200
|
200
|
200
|
--
|
|
Тиамин НСl
|
400
|
400
|
400
|
--
|
|
Биотин
|
20
|
20
|
20
|
--
|
|
Микроэлементы, мкг
|
|
Н3РО3
|
500
|
500
|
500
|
500
|
|
CuSO4
|
40
|
40
|
40
|
40
|
|
KJ
|
100
|
100
|
100
|
100
|
|
FeCl3
|
200
|
200
|
200
|
200
|
|
MnSO4
|
400
|
400
|
400
|
400
|
|
Na2MoO4
|
200
|
200
|
200
|
200
|
|
ZnSO4
|
400
|
400
|
400
|
400
|
|
Промытый агар, г
|
18
|
--
|
--
|
--
|
|
Количество сухой готовой среды фирмы «Difco» на 1 л, г
|
35
|
6.7
|
11.7
|
16.7
|
|
|
ПРОИЗВОДСТВО КРИСТАЛЛИЧЕСКОГО в-КАРОТИНА ИЗ
МОРКОВИ
Исходным сырьем для получения кристаллического в-каротина являет-ся морковь, содержащая среди каротиноидов 85--90% в-каротина. Наобо-рот, в тыкве содержание в-каротина составляет лишь 60--70%. Про-изводство кристаллического каротина включает следующие стадии: 1) экс-тракция каротина из сухого коагулята белков органическим растворителем; 2) омыление концентрата; 3) экстракция каротина из омыленной массы и 4) кристаллизация каротина.
Экстракция каротина. Большинство исследователей схо-дятся на применении в качестве органического растворителя для экстрак-ции р-каротина хлорированных углеводородов (в основном дихлорэтан). Существует мнение о целесообразности предварительной экстракции белкового коагулята спиртом для удаления стеринов, фосфатидов, свободных жирных кислот и других веществ. Однако дополнитель-ная экстракция спиртом сильно осложнит технологию производства, поэто-му необходимость этого процесса нуждается в технико-экономическом обос-новании. Экстракцию осуществляют дихлорэтаном в экстракторах непре-рывного действия (при крупном производстве) или в аппаратах типа Сокслета при небольших масштабах производства. Дихлорэтана в реактор загружают 400% к массе сухого коагулята. Экстракцию ведут в течение 1--1,5 ч. Содержание каротина в шроте не должно превышать 5% к введенному каротину с белковым коагулятом. Затем в испарителе 2 в присутствии СО2 отгоняют дихлорэтан (температура не должна быть выше 50° С).
Омыление концентрата. Омыление производят 10%-ным раствором ед-кого кали, которого добавляют около 10% к массе концентрата. Процесс проводят в реакторе 3 с обратным холодильником в течение 20 мин при 50° С. При омылении образуется осадок, содержащий до 80% каротина и жидкое мыло. Осадок отфильтровывают на нутч-фильтре 4 и промывают спиртом от мыла и красящих веществ.
Б. Савинов и А. Свищук указывают на образование нерасслаивающихся эмульсий при омылении липоидных экстрактов в хлорированных углеводородах. Это явление ими было успешно устранено совмещением стадии омыления со стадией экстракции.
Экстракция каротина из омыленной массы. Каротин экстрагируют ди-хлорэтаном в количестве, необходимом для растворения каротина при комнатной температуре, исходя из того, что в 100 мл дихлорэтана (ДХЭ) растворяется при температуре 25° С 1,16 г каротина.
Экстракцию ведут при комнатной температуре в реакционном аппарате 5, снабженном обратным холодильником и мешалкой. Затем массу фильт-руют на нутч-фильтре 6, промывают осадок чистым ДХЭ. Экстракт с про-мывным ДХЭ сгущают в вакуум-перегонном аппарате 7 до получения пере-сыщенного раствора.
Первая кристаллизация. Пересыщенный раствор спускают в кристалли-затор 8, где в течение 8 ч идет процесс кристаллизации вначале при комнатной температуре, а затем через 4 ч при охлаждении, к концу процесса тем-пературу доводят до 5° С.
Для увеличения выхода каротина на первой кристаллизации в пересыщенный раствор вводят этиловый спирт в отношении 1:2. Затем отфуговывают в центрифуге 9 выделившиеся кристаллы, промы-вают их спиртом и высушивают в вакуум-сушилке 10. Маточный раствор I поступает в сборник 11.
Вторая кристаллизация. Маточный раствор 1 перерабатывают совместно с промывными и мыльной массой. Для этого мыльную массу экстрагируют два раза ДХЭ в нутч-фильтре 4, а экстракт промывают водой в смесителе 12. Экстракт и маточник I направляют в сборник 13, откуда они поступают в вакуум-аппарат 14 для упаривания в концентрат П. Последний поступает в кристаллизатор 15, где кристаллизуется 24 ч. Фуговку производят при температуре 5° С в центрифуге 16. Кристаллы каротина II промывают спир-том и направляют на переработку совместно с экстрактом омыленной мас-сы (до первой кристаллизации). Маточный раствор II поступает в сборник 17.
Третья кристаллизация. Маточный раствор II совместно с промывными второй кристаллизации упаривают в вакуум-аппарате 18, кристаллизуют 72 ч в кристаллизаторе 19, фугуют в центрифуге 20. Кристаллы промыва-ют спиртом. Получают кристаллы каротина III, направляемые на переработ-ку в маточный раствор I и в виде отхода маточный раствор II -- в сборник
Нормы качества готовой продукции. Кристаллический каротин должен быть однородным, мелкокристаллическим сухим порошком без слежав19, фугуют в центрифуге 20. Кристаллы промыва-ют спиртом. Получают кристаллы каротина III, направляемые на переработ-ку в маточный раствор I и в виде отхода маточный раствор II -- в сборник
Нормы качества готовой продукции. Кристаллический каротин должен быть однородным, мелкокристаллическим сухим порошком без слежав шихся комков лилово-красноватого цвета с металлическим блеском. Точ-ка плавления каротина должна быть не ниже 160° С. Содержание в-каротина в кристаллах не менее 90%.
Вопросы усовершенствования технологии производства каротина из мор-кови. Интересные исследования в этой области были проведены Б. Савино-вым и его учениками. Исходя из факта локализации каро-тина на хромопластах, им было предложено заменить процесс прессования мезги моркови процессом вымывания пластид из клеток интенсивным пере-мешиванием мезги с водой в суспензионном экстракторе. Им же был разработан метод получения масляных концентратов каротина из влажного белкового коагулята путем применения центробежного смесителя. Разработан метод получения каротина из моркови и тыквы методом термиче-ской коагуляции белков в клетке, изучены вопросы экстракции каротина в многочленной батарее. К сожалению, эти методы не нашли широкого применения в связи с развитием химического синтеза витаминов.
ХИМИЧЕСКИЙ СИНТЕЗ в-КАРОТИНА
Метилгептенон (6-метилгептен-5-он-2). Получают его конденсацией диметилвинилкарбинола и ацетоуксусного эфира при температуре 160--165° С по следующей химической схеме:
В реактор 29 из нержавеющей стали, снабженный колонкой с дефлегма-тором и конденсатором, из мерника загружают вазелиновое масло (высококипящий разбавитель) и при температуре 210° С (в масле) загружают диметилвинилкарбинол и ацетоуксусный эфир так, чтобы температура ре-акционной массы была не ниже 160--165° С. Затем нагревание продолжают при температуре 160--180° С 3 ч до прекращения выделения газа (СО2). В сборник после конденсатора собирают отгон (спирт с примесью ацетона). Кубовый остаток разгоняют при остаточном давлении 5--6 мм рт. ст. в вакуум-перегонном аппарате 30. Готовый продукт поступает в приемник. Выход 60%.
Метилгептенон -- бесцветная жидкость, температура кипения 52--53°С при остаточном давлении 5 мм рт. ст. C8H14О, молекулярная масса 126,19; п2о = 1,4404; d20=0,8616, хорошо перегоняется с водяным паром; Хтах = 243 нм (в спирте), lgs =2,54.
Страницы: 1, 2, 3
|